분광 광도계의 일반 구성 요소의 원리 및 응용 소개

분광 광도계는 생물학적, 화학, 임상 및 환경 연구에 널리 사용됩니다.
분광 광도법은 분광 광도계의 샘플을 통해 광선을 통과시켜 화학 물질이 흡수 할 수있는 빛의 양을 측정합니다.
검출 된 광 강도를 측정함으로써, 방법은 샘플에서 용질의 농도를 결정하는데 사용될 수있다.
분광 광도법의 개념
샘플로 전송 된 빔은 광자 빔으로 구성됩니다.
광자가 샘플에서 분자를 만나면, 분자는 이들 중 일부를 흡수하고, 빔의 광자 수를 줄이고 검출 신호의 강도를 감소시킬 수 있습니다.
투과율은 샘플을 통과하는 빛의 일부입니다. 입사광 강도에서 샘플을 통과하는 광 강도로 정의됩니다.
흡광도는 분광 광도계에 의해 측정 된 양에 대응하는 투과율과 반대이다.
흡광도에 따르면, 용액 시료의 농도는 법안 Lambert 법칙에 의해 결정될 수 있으며, 이는 흡광도와 시료 농도 사이에 선형 관계가 있음을 보여줍니다. 맥주 램버트 법칙에 따르면 흡광도는 흡수 계수의 곱으로, 주어진 파장에서 용질에 의해 흡수되는 빛의 양과 빛이 통과하는 거리를 측정합니다. 샘플 또는 이동 거리 및 용질 농도. 일반적으로 흡광도 측정의 목적은 시료의 농도를 측정하는 것입니다.
분광 광도계의 구성 요소
각각의 분광 광도계는 광원, 콜리메이터 (강하고 직선 인 빔을 전송하기위한 렌즈 또는 집속 장치), 서로 다른 파장의 빔을 분리하기위한 모노 크로 메이터 및 원하는 파장의 웨이브 또는 그루브를 선택하기위한 길이 선택기로 구성됩니다. 이 비디오에 제시된 분광 광도계에 사용 된 빛의 파장은 자외선과 가시 광선 범위입니다. 분광 광도계는 또한 샘플 홀더, 광 검출기 및 검출기의 결과를 표시하는 스크린을 포함한다.
가장 최근의 분광 광도계는 실험 매개 변수를 제어하고 결과를 표시 할 수있는 컴퓨터에 직접 연결됩니다.
분광 광도계의 작동 원리
분광 광도 측정을 수행 할 때는 사용하는 생물학적 또는 화학적 용액의 유형에 따라 장갑 착용과 같은 적절한 예방 조치를 취하는 것이 중요합니다.
샘플의 UV-Vis 스펙트럼을 측정하기 전에 장치를 켜고 램프와 전자 장치를 가열하십시오.
동일한 pH 및 유사한 이온 강도를 갖지만 분석 할 성분이없는 동일한 용액의 빈 샘플을 준비합니다. 큐벳과 솔벤트가 빛을 분산시킬 수 있으므로 샘플을 분석해야합니다.
기존의 분광 광도계 샘플 홀더는 플라스틱 및 석영 보울을 고정하도록 설계되었습니다. 원래 용액을 용기에 피펫 팅합니다.
지문을 닦아서 용기 바깥쪽에 뿌린 후 큐벳을 샘플 홀더에 올바르게 넣고 뚜껑 덮개를 닫습니다.
열린 분광 광도계의 자외선이 눈과 피부를 손상시킬 수 있으므로 문을 닫는 것을 잊지 마십시오.
샘플로 전송 될 원하는 파장 또는 파장 범위를 프로그램하십시오. 이것은 분석되는 성분이 흡수 할 수있는 최상의 파장에 따라 다릅니다. 그런 다음 블랭크 샘플을 측정하여 기계를 제로화합니다.이 샘플은 샘플 버퍼로 인한 바닥 흡광도를 뺍니다.
수행중인 분광 광도 측정 실험의 유형에 따라 샘플 측정 전에 표준 곡선을 생성해야 할 수 있으며,이 샘플에서 분석 된 화합물의 농도를 확인할 수 있습니다.
샘플이 적절한 온도에 도달하도록하고 거품이 생기지 않도록 부드럽게 혼합하십시오. 그런 다음 샘플을 기기 내부의 보울에 직접 추가하고 판독 할 수 있습니다.
시료의 흡광도를 측정 한 후 실험이 올바르게 계산됩니다. 예를 들어, 농도 또는 효소 활성 수준을 결정하기 위해.
분광 광도계의 응용
분광 광도계의 일반적인 용도 중 하나는 세포 밀도를 측정하는 것입니다. 세포 밀도 측정은 박테리아의 대수 성장 곡선을 생성하는데 사용될 수 있으며, 이로부터 재조합 단백질의 통합을위한 최적의 시간이 결정될 수있다.
분광 광도계를 사용하여 화학 반응 속도를 측정 할 수도 있습니다. 이 구체 예에서, 흡광도는 452nm의 중간 반응을 통해 시간이지나면서 사라지는 효소 반응을 모니터링하는데 사용된다. 이 효소 단계의 속도는 데이터를 적절한 방정식과 일치시켜 계산할 수 있습니다.
마이크로 분광 광도계의 도입으로 샘플 홀더가 필요 없습니다. 이 분광 광도계는 표면 장력을 사용하여 샘플을 유지합니다.
Microspectrophotometer는 단백질 및 핵산을 포함한 생체 분자와 같은 작고 비싼 샘플의 질량 및 농도를 측정하는 최선의 선택입니다.
280nm에서 단백질의 흡광도는 트립토판, 티로신 및 페닐알라닌에서 발견되는 방향족 측쇄의 함량뿐만 아니라 두 시스테인 사이의 이황화 결합에 의존한다.
단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도 및 아미노산의 조성에 기초한 흡광 계수에 의해 결정될 수있다.
DNA와 RNA는 260nm에서 최대 흡광도를 가지므로 농도를 결정할 수 있습니다. 핵산의 순도는 또한 특정 파장에 대한 흡광도 판독의 비로부터 평가 될 수있다.