분광 광도계 (UV 법)에서 단백질의 직접 정량화
이 방법은 280 nm의 파장에서 단백질을 직접 시험하는 것입니다. Warburg 식을 선택하면 광도계에서 직접 시료 농도를 표시하거나 적절한 변환 방법을 선택하여 흡광도 값을 시료 농도로 변환 할 수 있습니다. 단백질 결정 과정은 매우 간단합니다. 블랭크를 먼저 시험 한 다음 단백질을 직접 시험하십시오. 버퍼에 약간의 불순물이 존재하기 때문에 일반적으로 320nm의 "백그라운드"정보는 제거되고이 기능은 "ON"으로 설정됩니다. 시험 핵산과 유사하게, A280의 흡광도 값은 적어도 0.1A보다 커야하고, 최적의 선형 범위는 1.0-1.5 사이이다. Warburg 공식을 사용하여 실험에서 시료 농도를 표시하면 판독 값이 "표류"하는 것으로 나타났습니다. 이는 정상적인 현상입니다. 실제로 A280의 흡광도 값이 1 %를 초과하지 않는 한 결과는 매우 안정적입니다. 드리프트가 발생하는 이유는 워 버그의 공식의 흡광도 값이 농도로 변환되어 특정 요인을 곱한 것입니다. 흡광도 값에 약간의 변화가있는 한 농도가 증폭되어 결과가 매우 불안정합니다. 단백질 직접 정량화 방법은 비교적 순수하고 상대적으로 단일 성분의 단백질을 시험하는 데 적합합니다. UV 직접 정량화는 색상 측정보다 빠르고 쉽게 수행됩니다. 그러나 DNA 간섭과 같은 병행 물질의 간섭을 받기 쉽고 민감도가 낮 으면 단백질 농도가 높아야합니다.
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