분광 광도계 의 핵산 정량
핵산의 정량화는 분광 광도계 에서 가장 자주 사용되는 기능입니다 . 올리고 뉴클레오타이드, 단일 가닥, 이중 가닥 DNA 및 RNA는 완충액으로 정량 할 수 있습니다. 핵산의 최고 흡수 피크의 흡수 피크는 260 nm이다. 각각의 핵산은 상이한 분자 조성을 가지며, 따라서 상이한 전환 인자를 갖는다. 다른 유형의 핵산을 정량화하려면 사전에 해당 계수를 선택하십시오. 예를 들어 10OD의 흡광도는 dsDNA 50 μg / ml, ssDNA 37 μg / ml, RNA 40 μg / ml 및 Olig 30 μg / ml와 같습니다. 시험 후의 흡광도 값을 상기 계수로 환산하여 대응하는 시료 농도를 구한다. 테스트하기 전에 올바른 절차를 선택하고 원액과 희석액의 부피를 입력 한 다음 공시 료 및 샘플 용액을 테스트합니다. 그러나 실험은 쉽지 않았습니다. 불안정한 수치는 실험자들에게 가장 큰 두통입니다. 기기의 감도가 높을수록 흡광도 드리프트가 커집니다.
실제로, 분광 광도계 의 설계 원리와 작동 원리는 흡광도 값이 특정 범위 내에서 변할 수있게합니다. 즉, 계측기는 어느 정도 정확성과 정확성을 갖습니다. 같은 Eppendorf Biophotometer 정확도 ≤ 1.0 % (1A). 이러한 여러 검사의 결과는 평균 1.0 % 사이에 차이가 있으며 모두 정상입니다. 또한, 핵산의 물리 화학적 성질, 핵산 용해 용 완충액의 pH, 이온 농도 등도 고려해야한다 : 시험 중, 너무 높은 이온 농도는 또한 TE로 표류 해 독서를 크게 안정시킵니다. 샘플의 희석 된 농도는 또한 무시할 수없는 요소입니다 : 샘플, 특히 핵산 샘플에 불가피하게 작은 입자가 존재하기 때문입니다. 이러한 작은 입자의 존재는 시험 효과를 저해합니다. 시험 결과에 미치는 입자의 영향을 최소화하기 위해, 핵산의 흡광도는 적어도 0.1 A 일 필요가 있고, 흡광도는 바람직하게는 0.1-1.5 A이다.이 범위에서, 혼합물이 없으며 블랭크에 현탁액이 없다. 그렇지 않으면 판독 값이 심하게 흐트러집니다. 블랭크와 샘플을 시험하기 위해 동일한 비색 컵을 사용해야합니다. 그렇지 않으면 농도 차이가 너무 큽니다. 변환 계수와 시료 농도 단위는 동일합니다. 창문으로 입은 큐벳; 샘플의 부피는 컬러 컵 등의 필요한 최소 부피보다 커야합니다.
핵산 농도 이외에 분광 광도계 는 시료의 순도를 나타내는 목적으로 A260 / A280 비율과 같은 시료의 순도를 나타내는 여러 가지 매우 중요한 비율을 동시에 나타냅니다. 이는 단백질의 흡수 피크 280 nm이다. 순수한 샘플은 1.8 (DNA) 또는 2.0 (RNA)보다 큰 비율을 갖습니다. 비율이 1.8 또는 2.0보다 작 으면 단백질 또는 페놀 성 물질의 존재를 나타냅니다. A230은 탄수화물, 펩타이드, 페놀 등과 같은 시료에 약간의 오염 물질이 있음을 나타냅니다. 순수한 핵산 A260 / A230의 비율은 2.0보다 큽니다. A320은 용액의 탁도와 다른 간섭 요인을 감지합니다. 순수 샘플, A320은 일반적으로 0입니다.
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